Sterilisasi dan pembuatan media

Mikroorganisme adalah makhluk hidup yang paling kecil dan bersifat mikroskopis atau tidak kasat mata. Mikroorganisme adalah makhluk hidup sederhana yang terbentuk dari satu atau beberapa sel yang hanya dapat dilihat dengan mikroskop, berupa tumbuhan atau hewan yang biasanya hidup secara parasit atau saprofit. Termasuk golongan ini adalah bakteri, cedawan atau jamur tingkat rendah, ragi yang menurut sistematik  masuk golongan jamur, ganggang, hewan bersel satu atau protozoa, dan virus yang hanya nampak dengan mikroskop electron. Satu tahapan penting yang harus dilakukan dan merupakan aturan standar selama melaksanakan praktikum atau kerja mikrobiologi adalah sterilisasi. Prinsip sterilisasi adalah proses atau kegiatan membunuh semua organisme atau spora yang ada pada alat atau bahan yang akan digunakan. Sterilisasi sangat diutamakan dalam melakukan diagnose mikrobiologi , baik itu sterilisasi alat maupun medianya. Sterilisasi terdiri atas tiga yaitu cara mekanik, cara fisik, dan cara kimiawi. Sterilisasi cara mekanik (filtrasi) menggunakan suatu saringan yang berpori sangat kecil (0.22 mikron atau 0.45 mikron) sehingga mikroba tertahan pada saringan tersebut. Proses ini ditujukan untuk sterilisasi bahan yang peka panas, misalnya larutan enzim dan antibiotik. Sterilisasi secara fisik dapat dilakukan dengan pemanasan dan penyinaran. Sterilisasi secara kimiawi biasanya menggunakan senyawa desinfektan, antara lain alcohol.

   Media pertumbuhan adalah suatu subsrat untuk menumbuhkan mikroba. Media pertumbuhan mikroba adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat makanan (nutrisi) yang diperlukan mikroorganisme untuk pertumbuhannya. Mikroba memanfaatkan nutrisi media berupa molekul-molekul kecil yang disusun untuk menyusun komponen sel. Media pertumbuhan dapat dilakukan isolat mikroorganisme menjadi kultur murni dan juga memanipulasi komposisi media pertumbuhannya. Jenis-jenis media pertumbuhan mikroba  terdiri atas media berdasarkan sifat fisik dan media berdasarkan komposisi. Media bersadarkan sifat fisik yaitu media padat merupakan media yang mengandung agar 15% sehingga setelah dingin media menjadi padat. Media setengah padat merupakan media yang mengandung agar 0,3-0,4% sehingga menjadi sedikit kenyal, tidak padat, tidak begitu cair. Media cair, yaitu media yang tidak mengandung agar. Media berdasarkan komposisi yaitu media sintetis, merupakan media yang komposisi zat kimianya diketahui jenis dan takarannya secara pasti. Media semi sintetis, merupakan media yang sebagian komposisinya diketahui secara pasti. Media nonsintetis, yaitu media yang dibuat dengan komposisi yang tidak diketahui secara pasti dan langsung diekstrak dari bahan dasarnya.

1.      Apa itu Sterilisasi?

Sterilisasi adalah suatu proses penghilangan semua jenis organisme hidup, dalam hal ini adalah mikroorganisme  (protozoa, fungi, bakteri, mycoplasma, virus) yang terdapat dalam suatu benda. Proses ini melibatkan aplikasi biocidal agent atau proses fisik dengan tujuan untuk membunuh/menghilangkan mikroorganisme. Prinsip yaitu mematikan semua mikroorganisme baik induk spora maupun sel mikroba itu sendiri yang kemungkinan kontaminan pada alat atau media pembuat mikroba. Jenis-jenis sterilisasi terbagi atas 3 yaitu secara mekanik, fisik dan kimiawi. Secara mekanik (filtrasi) menggunakan suatu saringan yang berpori sangat kecil (0.22 mikron atau 0.45 mikrob) sehingga mikroba tertahan pada saringan tersebut.. Sterilisasi secara fisik dapat dilakukan dengan pemanasan & penyinaran. Pemanasan yaitu Pemijaran (dengan api langsung) dengan cara membakar alat pada api secara langsung. Sterilisaisi secara kimiawi biasanya menggunakan senyawa desinfektan antara lain alkohol.

2.      Sterilisasi fisik dengan Autoclave

Autoclave adalah alat sterilisasi dengan menggunakan panas uap dan tekanan tinggi. Proses sterilisasi dilakukan dengan cara alat dan media dimasukkan di dalam autoclave pada suhu 121^oC dengan tekanan 1 atm  selama 15 menit. Peningkatan tekanan pada autoclave tidak dimaksudkan untuk membunuh mikroorganisme, melainkan meningkatkan suhu dalam autoclave. Suhu yang tinggi inilah yang akan membunuh mikroorganisme. Autoclave  terutama pada suhu 121⁰C  ditujukan untuk membunuh endospora, yaitu sel resisten yang diproduksi oleh bakteri, sel ini tahan terhadap pemanasan, kekeringan, dan antibiotik.

3.      Sterilisasi Kimiawi dengan Alkohol

Alkohol merupakan salah satu bahan sterilisasi basah. Alkohol yang sering digunakan dalam sterilisasi adalah alkohol 70%. Alkohol jenis ini banyak digunakan jadi bahan sterilisasi karena bisa membunuh bakteri atau kontaminan melalui denaturasi unsur protein dan melarutkan membran lemak yang ada di tubuh bakteri tersebut.

4.      Media pertumbuhan mikroba

Media adalah bahan yang terdiri atas kandungan-kandungan nutrisi yang dibutuhkan untuk pertumbuhan mikroba.  Media pertumbuhan mikroba berdasarkan komposisinya terbagi atas tiga yaitu, media alami, sintesis dan semo-sintesis. Media alami adalah media yang tersusun atas bahan-bahan alami yang tidak diketahui secara pasti komposisinya, contohnya yaitu tomato juice agar. Medium sintetis yaitu media yang komposisi zat kimianya diketahui jenis dan takarannya secara pasti. Zat-zat buatan yang digunakan merupakan ekstrak dari bahan-bahan yang mengandung nutrisi sesuai dengan kebutuhan mikroba seperti ekstrak daging, kentang, ragi dan sebagainya. Media sintetik digunakan dalam praktikum untuk menguji metabolisme suatu mikroorganisme. Media sintetik yang digunakan dalam praktikum ini yaitu media Natrium Agar (NA), Potato Dextrose Agar (PDA), dan Plate Count Agar (PCA) yang komposisi pembuatannya ditentukan oleh manusia.  Media semisintetis merupakan media perpaduan antara media sintetik dan media alami. Media ini dibuat dengan cara mencampurkan media alami seperti tauge dan kentang  dengan media sintetik agar. Pencampuran media dilakukan agar komposisi dari media yang dibuat dapat diketahui secara pasti.

·         Media Potato Dextrose Agar (PDA)

Media Potato Dextrosa Agar (PDA) merupakan media sintetik.  Media merupakan tempat dimana tejadi perkembangan organisme.  Organisme menyerap karbohidrat dari kaldu kentang dan gula serta dari agar yang telah bercampur.  Hal inilah yang menyebabkan mengapa kentang harus di potong dadu, agar karbohidrat di kentang dapat keluar dan menyatu dengan air sehngga menjadi kaldu.  Semakin kecil permukaan, maka semakin besar daya osmosisnya. Media Potato Dextrose Agar (PDA)  berfungsi untuk menumbuhkan atau mengidentifikasi yeast dan kapang.

·         Media Plate Count Agar (PCA)

Plate Count Agar (PCA) atau yang juga sering disebut Standard Methods Agar merupakan sebuah media pertumbuhan mikroorganisme yang umum digunakan untuk menghitung jumlah mikroorganisme total yang terdapat pada setiap sample makanan, produk susu, air limbah dan sample-sample lainnya yang biasanya menggunakan metode Total Plate Count. Penggunaan PCA sebagai media untuk menghitung jumlah total dari mikroorganisme sudah dilakukan sejak lama. Saat ini industri-industri seperti makanan, produk susu dan juga pengolahan limbah sudah menerapkan penghitungan jumlah total mikroorganisme pada sample mereka sesuai dengan standar yang ada menggunakan PCA. Komposisi PCA yaitu casein 5 g, yeast extract 2,5 g, dextrose 1 g dan juga agar 15 g.

·         Media Nutrient Agar (NA)

NA merupakan suatu  medium yang berbentuk padat yang merupakan perpaduan antara bahan alamiah dan senyawa-senyawa kimia. NA dibuat dari campuran ekstrak daging dan peptone dengan menggunakan agar sebagai pemadat. Penggunaan agar digunakan  karena sifatnya yang mudah membeku dan mengandung karbohidrat yang berupa galaktam sehingga tidak mudah diuraikan oleh mikroorganisme. Ekstrak beef  dan pepton digunakan sebagai bahan dasar dalam pembuatan NA karena merupakan sumber protein, nitrogen, vitamin serta karbohidrat yang sangat dibutuhkan oleh mikroorganisme untuk tumbuh dan berkembang. Medium NA merupakan medium yang berwarna coklat muda yang memiliki konsistensi yang padat dimana medium ini berasal dari sintetik dan memiliki  kegunaan sebai medium untuk menumbuhkan bakteri. Fungsi dari media NA yaitu untuk pertumbuhan mikroorganisme yang tidak selektif.

·         Media Kentang Agar

Media kentang agar merupakan media semi sintesis yang berfungsi untuk menumbuhkan kapang. Media kentang agar menggunakan ekstrak kentang sebagai sumber utama nutrisi pertumbuhan kapang. Media kentang agar terdiri dari ekstrak dari kentang 100 gram, gula pasir 17 gram, dan agar 4 gram. Media ini merupakan media padat karena mengandung agar.

·         Media Tauge Agar

Tauge Agar termasuk medium semi alamiah karena tersusun atas bahan alami (tauge) dan bahan sintesis (Sukrosa dan agar). Medium ini berdasarkan konsistensinya termasuk medium padat karena terdapat agar sebagai bahan penyusunnya. Sedangkan berdasarkan susunan kimianya termasuk medium non sintetik/semi alamiah. Komposisi Tauge Agar yaitu Tauge 5 g, sukrosa 3 g, agar 0,75 g, aquades 50 ml. Tauge Agar digunakan untuk menumbuhkan khamir dan kapang.

Daftar Pustaka:

Anisah, 2015. Media Alternatif untuk Pertumbuhan Bakteri. Surakarta: Universitas Muhammadiyah Surakarta

Benson. 2001. Microbiological Applications Lab Manual-Eighth Edition. Burgin: The McGraw−Hill Companies.

Dwidjoseputro, D. 1994. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta: Djambatan.

Hadioetomo, R. S. 1993. Mikrobiologi Dasar dalam Praktek. Jakarta: Teknik dan Prosedur Dasar Laboratorium. PT Gramedia Pustaka Utama.

Hafsan, Sukmawati E., Masri M. 2015   Penuntun Praktikum Mikrobiologi. Makassar: Universitas Islam Negeri.

Harley and Presscot. 2002. Laboratory Exercisein Microbiology. USA. McGraw. Hill Publisher, pp

Hendrati, P. 2013. Prinsip Sterilisasi Menggunakan  Autoclave. Purwokerto: Universitas Jendral Soedirman.

Partic, L. 2008. Media pertumbuhan mikroorganisme.http://duniamikro.com. Diakses pada tanggal 9 Maret 2017 di Makassar.